Tissue Cytometry技術(shù)在臨床免疫性疾病的轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究
移植物抗宿主?。℅vHD）不同于移植排斥反應，主要是由于移植后異體供者移植物中的T淋巴細胞，以受者靶細胞為目標，發(fā)動細胞毒性攻擊而致病，特異性表現(xiàn)為上皮細胞的凋亡，多發(fā)生在皮膚、腸道及肝組織中。而在白血病的治療中，由化學療法和放射療法之后的干細胞移植，通常也會引發(fā)GvHD，導致嚴重的不良炎癥反應，尤其是在皮膚或腸道中。到目前為止，其特異性發(fā)生的原因尚不清楚。
維也納醫(yī)學院皮膚科的Georg Stary和Johanna Strobl研究小組現(xiàn)已得到一種免疫機制影響因素。該結(jié)果發(fā)表在Science Translational Medicine雜志（IF=16.304）上。
白血病是一種用于描述造血系統(tǒng)癌化的惡性疾病，其中白細胞前體不受控制地增殖。針對白血病的治療中，化學療法和放射療法用于破壞異常細胞，然后通過正常干細胞移植來替代。在白血病中，健康骨髓干細胞或造血干細胞的移植通常是患者康復的唯一希望。
研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性免疫系統(tǒng)中存在所謂的皮膚駐留性T細胞和非活性T細胞，它們在化學療法和放射療法的保護下完好無損，并在上皮細胞之間和下方繼續(xù)生存了十年，循環(huán)系統(tǒng)中的T細胞則被破壞殆盡。
在未發(fā)生移植物抗宿主病的患者中，治療后殘留的組織駐留T細胞甚至被證明對受體有益，因為他們承擔了其在免疫防御和預防感染中的作用。
將來，該研究結(jié)果可能會導致新的治療策略，該方法可通過預先操縱受體的非活性T細胞來幫助避免或至少最小化干細胞移植后不良的和劇烈的炎癥反應。另外，對組織駐留T細胞進行針對性的調(diào)節(jié)可能有助于針對其他慢性炎性皮膚病，例如牛皮癬或神經(jīng)性皮炎的新治療方法的開發(fā)。
利用TissueGnostics公司TissueFAXS系統(tǒng)對組織樣本進行全景成像和TissueQuest /StrataQuest組織流式定量分析。
組織流式定量分析
利用StrataQuest軟件對供體來源和宿主來源的T細胞通過X和Y染色體的自動定量分析，并由兩名獨立的復檢者進行組織學驗證。（分別在同一皮膚的四個單獨部分取得樣本）
X / Y-FISH
文章利用X / Y-FISH方法，對宿主/捐贈者源性的 T細胞進行了追蹤。X / Y-FISH是一種快速篩選大量骨髓細胞中是否存在宿主細胞的有用方法。通過這種方法，研究者獲得了在供體細胞輸注后10年的時間跨度內(nèi)，54例性別不匹配的HSCT患者的單一活檢(活檢部位，上臂健康外觀皮膚n = 44;移植物抗宿主病損傷n = 10)的追蹤數(shù)據(jù)。
文章作者使用20X物鏡獲得了組織學原位的全景圖像后，在探針分子水平對樣本中FISH信號進行了定量數(shù)據(jù)的獲取以及不同實驗組之間的數(shù)據(jù)分析。
*視頻中本文作者Dr Johanna Strobl結(jié)合
Tissue Cytometry組織流式定量分析技術(shù)
對文章做了詳細介紹。
Fig.1 αβTCR、CD3和CD69的免疫熒光染色圖像。
Fig.2 基因表達為基礎的標記物識別抗放化療的T細胞。
C：通過免疫熒光染色確定CCR7+和CD62L+皮膚T細胞相對數(shù)量。
D：CCR7和CD62L的免疫熒光染色。
E：通過免疫熒光染色確定CD69+和CD103+皮膚T細胞的相對數(shù)量。
F：CD69和CD103的免疫熒光染色，表明對放化療耐藥的皮膚駐留性T細胞。
Fig. 3 allo-HSCT（異基因造血干細胞移植）后Long-term Trm保持10年
A：異基因造血干細胞移植后8年患者的FISH標記X（綠色）和Y（紅色）染色體、CD3（黃色）和DAPI的圖像。
B：HSCT后外周血（左）和皮膚T細胞（右）中宿主T細胞的百分比。
C：在異基因造血干細胞移植和采樣時間點（n=5）之間有病毒性皮膚感染史的患者和allo-HSCT后無病毒性皮膚感染的患者皮膚中宿主T細胞的百分比。
D：移植前后指定時間供體和宿主皮膚T細胞對指定組織駐留標記物陽性的比例。
E：aGVHD1皮膚T細胞浸潤的X和Y染色體（分別為綠色和紅色）的CD3（黃色）和FISH。圖片中的紅色和綠色標記使用了TissueFAXS軟件的自動組織細胞識別功能，其中紅色圈選CD69陽性細胞，綠色圈出CD3單陽性細胞。
F：aGVHD1和cGVHD1中T細胞中宿主細胞的百分比。
G: 炎癥皮膚中乳頭狀真皮和下表皮中宿主（XY，橙色箭頭）和供體（XX，白色箭頭）T細胞的空間關系圖像。圖像數(shù)據(jù)采用StrataQuest軟件進行自動，所有T細胞（CD3+）都用箭頭標記；未標記的細胞是其他類型的細胞。
Fig. 4 宿主來源的Trm增殖導致GVHD皮膚炎癥
C：Ki-67+CD69+T細胞/mm2的皮膚（左）和相對頻率（右）。
D：Ki-67細胞表達在CD3+T細胞和CD3+CD69+T細胞中的頻率。
E：X/Y-FISH和免疫染色識別GVHD中增殖（Ki-67+）T細胞（左）和CD69+T細胞（右）中供體與宿主來源細胞的百分比
F：GVHD病變中CD3和溶解顆粒和CD3和細胞因子（IFN-γ；底部）的免疫熒光圖像。
G: 免疫熒光標記和X/Y-FISH識別供體和宿主T細胞中穿孔素、顆粒酶B和IFN-γ陽性。
H：移植物抗宿主病病變中FoxP3+T細胞的供體/宿主嵌合體（左）以及供體和宿主T細胞之間Tconv（FoxP3-）與Treg（FoxP3+）（右）的比率。
I：移植物抗宿主病病變中CD3和轉(zhuǎn)錄因子FoxP3的免疫熒光染色。每個數(shù)據(jù)點代表一名患者兩次獨立測量的平均值。
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